On approval of the Rules for determining the immunological compatibility of tissues during transplantation of organs (part of an organ) and (or) tissues (part of tissue) and Regulation on the HLA-laboratory activities

Order of the Acting Minister of Healthcare of the Republic of Kazakhstan dated October 27, 2020, No. ҚР ДСМ -159/2020. Registered with the Ministry of Justice of the Republic of Kazakhstan on October 29, 2020, No. 21528.

Unofficial translation

In accordance with paragraph 2 of Article 211 of the Code of the Republic of Kazakhstan dated July 7, 2020 "On public health and healthcare system" I HEREBY ORDER:

1. To approve:

1) the Rules for determining the immunological compatibility of tissues during transplantation of organs (parts of an organ) and (or) tissues (parts of tissue) in accordance with Annex 1 to this Order;

2) the Regulation on the HLA-laboratory activities in accordance with Annex 2 to this Order.

2. To invalidate the Order of the Minister of Healthcare of the Republic of Kazakhstan dated April 8, 2019, No. ҚР ДСМ -21 "On approval of the Regulations on the HLA laboratory" (registered in the State Register of Normative Legal Acts under No. 18479, published on April 16, 2019, the Reference Control Bank of normative legal acts of the Republic of Kazakhstan in electronic form).

3. The Department of Medical Aid Organization of the Ministry of Healthcare of the Republic of Kazakhstan, in accordance with the procedure established by the legislation of the Republic of Kazakhstan, shall ensure:

1) state registration of this Order with the Ministry of Justice of the Republic of Kazakhstan;

2) posting this Order on the Internet resource of the Ministry of Healthcare of the Republic of Kazakhstan;

3) within ten working days from the date of state registration of this Order in the Legal Department of the Ministry of Healthcare of the Republic of Kazakhstan the information on the implementation of the measures provided for in subparagraphs 1) and 2) of this paragraph.

4. Control over the execution of this order shall be entrusted to the Vice-Minister of Healthcare of the Republic of Kazakhstan, A.Giniyat

5. This order shall come into effect upon the expiration of ten calendar days after the day of its first official publication.

Acting Minister of Healthcare of the Republic of Kazakhstan

M. Shoranov

Annex 1 to the Order of the Acting Minister of Healthcare of the Republic of Kazakhstan dated October 27, 2020 No. ҚР ДСM-159/2020

The Rules for determining the immunological compatibility of tissues during transplantation of organs (part of an organ) and (or) tissues (part of tissue)

Chapter 1. General Provisions

1. These Rules for determining the immunological compatibility of tissues during transplantation of organs (parts of an organ) and (or) tissues (parts of tissue) (hereinafter referred to as the Rules) have been developed in accordance with paragraph 2 of Article 211 of the Code of the Republic of Kazakhstan dated July 7, 2020 "On public health and health care system" (hereinafter referred to as the Code) and shall determine the procedure for determining the immunological compatibility of tissues during transplantation of organs (part of an organ) and (or) tissues (part of tissue).

2. The following concepts shall be used in these Rules:

1) allele - different forms of the same gene located in the same regions (locus) of paired chromosomes;

2) antigens - glycoprotein molecules located on the surface of the cell membrane of leukocytes, which are responsible for recognizing foreign agents;

3) hematopoietic stem cells - hematopoietic cells of the human bone marrow that have pluripotency and are in the process of life in the bone marrow, peripheral blood and umbilical cord blood;

4) register of donors of hematopoietic stem cells (bone marrow) - a list of persons who agree to the donation of hematopoietic stem cells (bone marrow) and typed according to the HLA system;

5) genes - sections of chromosomes encoding the structure and function of antigens;

6) tissue compatibility - the similarity of the tissues of the donor and the potential recipient for specific antigens of the HLA system, which determines the compatibility of the donor and recipient during organ transplantation (part of an organ) and (or) tissues (part of tissue);

7) locus - a linear portion of the chromosome occupied by one gene;

8) sequencing of nucleic acids - determination of their primary amino acid or nucleotide sequence;

9) sensitization - the acquisition of a specific hypersensitivity by the body to foreign antigens;

10) solid organs - all dense organs of the body, such as kidneys, heart, lungs, liver, pancreas;

11) HLA-studies - a set of laboratory tests carried out to determine the immunological compatibility of tissues during transplantation of organs (part of an organ) and (or) tissues (part of a tissue);

12) HLA-system - a system of antigens located on human leukocytes and determining the tissue compatibility of donor and recipient during organ and tissue transplantation, as well as hematopoietic stem cells;

13) HLA-phenotype - individual immunological parameters of a person, genetically encoded;

14) fragment analysis - determination of the size of DNA fragments and (or) the intensity of fluorescence of labeled DNA fragments;

15) STR-locus - molecular markers in genetic and genomic studies, which are varying regions in nuclear DNA, consisting of repeating monomers;

16) profile specialist - a medical worker with a higher medical education who has a certificate in a certain specialty;

17) republican transplant coordinator - a doctor coordinating the work of regional transplant coordinators and efficient interdepartmental interaction of medical organizations on the issues of transplantation service in the Republic of Kazakhstan, who is a full-time employee of the Coordination Center;

18) regional transplant coordinator - a doctor ensuring interdepartmental interaction of medical organizations in the field of (or) organs (parts of organs) and tissue transplantation (tissue parts) in regional centers, cities of republican significance and the capital, who is a full-time employee of the Coordination Center

19) stationary transplant coordinator - a doctor who is a full-time employee of a donor hospital and is subordinate to the regional transplant coordinator for the coordination of the transplant service in the relevant region, city of republican significance, the capital;

20) register of potential recipients of organs (parts of organs) and (or) tissue (parts of tissue) (hereinafter referred to as the register) – the database of potential recipients of organs (parts of organs) and (or) tissue (parts of tissue);

21) medical information system - a medical information system ensuring the maintenance of the processes of healthcare entities in electronic format;

22) SSP method - typing by polymerase chain reaction using sequence-specific primers;

23) SBT method - typing by nucleic acid sequencing by determining the nucleotide sequence of deoxyribonucleic acid;

24) SSO method - typing by the polymerase chain reaction method using fluorescently labeled microspheres carrying sequence-specific oligonucleotide probes on the surface;

25) NGS method is the sequencing of the next (or) new generation to determine the nucleotide sequence of DNA and RNA to obtain a description of its primary structure;

26) EIA method - determination of leukocyte antibodies by enzyme immunoassay;

27) method of fluorescence cytometry - determination of leukocyte antibodies using fluorescently-labeled microspheres carrying leukocyte antigens on the surface.

Footnote. Clause 2 as amended by the Order of the Minister of Healthcare of the Republic of Kazakhstan dated 30.09.2021 No. КР ДСМ -101 (shall be enforced upon expiry of ten calendar days after the date of its first official publication).

Chapter 2. The procedure for determining the immunological compatibility of tissues during transplantation of organs (parts of an organ) and (or) tissues (parts of tissue)

3. Determination of the immunological compatibility of tissues during transplantation of organs (part of an organ) and (or) tissues (part of tissue) shall be carried out:

1) for potential recipients and their donors during transplantation of organs (part of an organ) and (or) tissues from an intravital and (or) posthumous donor;

2) for potential recipients, who do not have a living donor and are included in the register;

3) for recipients and donors for hematopoietic stem cell transplantation.

Footnote. Clause 3 in the wording of the Order of the Minister of Health of the Republic of Kazakhstan dated 30.09.2021 No. КР ДСМ -101 (shall be enforced upon expiry of ten calendar days after the date of its first official publication).

4. Determination of the immunological compatibility of the recipient and the donor shall be carried out based on the following provided to the HLA-laboratory:

1) citizens of the Republic of Kazakhstan receiving transplant services on the territory of the Republic of Kazakhstan within the guaranteed volume of free medical care, referrals from the transplant center of the Republic of Kazakhstan, where the provision of transplant services is planned;

2) by persons who are not citizens of the Republic of Kazakhstan and receiving transplant services on the territory of the Republic of Kazakhstan within the framework of an agreement concluded with transplant centers, referrals from these transplant centers;

3) by persons who are not citizens of the Republic of Kazakhstan, acting as a potential intravital donor for a citizen of the Republic of Kazakhstan receiving transplant services on the territory of the Republic of Kazakhstan within the guaranteed volume of free medical care, referrals from the transplant center of the Republic of Kazakhstan, where it is planned to provide transplant services ;

4) by persons who are not citizens of the Republic of Kazakhstan and who do not receive services for the transplantation of solid organs in the territory of the Republic of Kazakhstan, within the framework of a paid contract with a laboratory, a referral drawn up on the official letterhead of the authorized body in the field of healthcare of the country of which the potential living donor is a citizen and (or ) recipient;

5) by persons who are not citizens of the Republic of Kazakhstan and do not receive services for transplantation of hematopoietic stem cells in the territory of the Republic of Kazakhstan, within the framework of a paid contract with a laboratory, a referral drawn up on the official letterhead of the authorized body in the field of healthcare of the country of which the patient is a citizen and (or) his potential living donor and/or foreign transplant center;

6) by persons who are citizens of the Republic of Kazakhstan planning to receive a paid service for the transplantation of a solid organ in a foreign clinic, within the framework of a paid contract with a laboratory, a referral drawn up on the official letterhead of the specified clinic or transplant center of the Republic of Kazakhstan, concluded with the recipient and (or) the donor;

7) persons who are citizens of the Republic of Kazakhstan planning to receive a paid service for transplantation of hematopoietic stem cells in a foreign clinic, within the framework of a paid contract with a laboratory based on a referral drawn up on the official letterhead of the said clinic or transplant center of the Republic of Kazakhstan;

8) by persons who are citizens of the Republic of Kazakhstan receiving services for transplantation of a solid organ or hematopoietic stem cells in a foreign clinic within the framework of the "Treatment Abroad" program, within the guaranteed volume of free medical care, referral of the authorized body in the field of healthcare care or the transplant center of the Republic of Kazakhstan.

5. The official letterhead of a medical organization shall indicate:

Surname, first name, patronymic (if any), date of birth, citizenship, nationality, blood type and Rh status, address of residence of the recipient and his potential intravital donor(s);

information about the diagnosis of the recipient;

blood transfusion, obstetric and transplant anamnesis of the recipient;

planned type of surgery;

information about the attending physician and his contacts for transmission of results.

6. After confirmation of the referral, blood samples are taken for HLA studies to determine the immunological compatibility of tissues during organ (part of an organ) and (or) tissue (part of tissue) transplantation.

7. Before blood sampling, the surname, first name, patronymic (if any), and date of birth of the recipient and (or) donor, blood group, and Rh status, date and time of collection are indicated on the test tube.

A blood sample shall be taken from a recipient and (or) donor from a vein into an appropriate vacuum tube in accordance with Annex 1 to these Rules. For HLA typing by the molecular genetic method, blood sampling shall not be performed from the fistula vein, as well as from recipients receiving heparin-containing drugs after the hemodialysis procedure.

After filling, the tubes with blood shall be gently mixed by inverting the tube 8-10 times.

Blood samples shall be accompanied by a referral with the obligatory filling of all columns according to the document proving the identity of the recipient and (or) donor and certified by the seal or stamp of the sending organization (doctor). If the recipient and (or) the donor has not reached the age of 18, the attached copy of the certificate of birth.

8. Blood samples shall be transported at temperatures from +2 ° C to +8 ° C in light-protected thermal containers (cooler bag) with heat-insulating properties and a tight-fitting lid. Samples shall be transported upright in test tube racks. Sample delivery time is 24 hours from the time of collection of a blood sample for serological tests and 72 hours for other types of tests.

9. In the presence of hemolysis, overheating, freezing, or after the expiration of the period from the moment of collection, the blood sample shall not be accepted for research.

10. The results of studies to determine histocompatibility carried out in foreign laboratories shall not be recognized as valid for deciding on the possibility of transplantation in the Republic of Kazakhstan.

The results of HLA studies shall be transferred to the healthcare organization (the attending physician or courier who has a power of attorney or an authorized person specified in the official letter) that sent the material for research. When transferring research results, secure Internet channels and additional file password protection shall be used in compliance with confidentiality standards.

It is not allowed to transfer the results to a potential donor or recipient, as well as to their relatives.

Paragraph 1. The procedure for determining immunological compatibility in recipients and donors during organ transplantation (part of an organ) from an intravital donor and (or) a posthumous donor

11. To determine the immunological compatibility in recipients and donors in kidney and pancreas transplantation from an intravital and (or) posthumous donor, the HLA-laboratory staff shall carry out an initial determination of histocompatibility at the A, B, and Cw class I locus and the DRB1 class II locus of the HLA system. To determine histocompatibility, typing of intravital donor and a recipient shall be carried out at the indicated locus.

Primary typing shall be carried out by the serological method at the low-resolution level of the A, B, and Cw class I locus. Confirmatory typing of the A, B, and DRB1 locus of the recipient and the selected donor shall be carried out by the molecular genetic method at a low-resolution level using SSP or SSO from a new blood sample.

A twice-determined typing result obtained using two different blood samples in immunological typing laboratories, determined in accordance with the legislation of the Republic of Kazakhstan, and shall be conclusive.

12. Recipients in need of organ (tissue) transplantation shall be checked for the presence of HLA antibodies in the direction of the inpatient transplant doctor and (or) the republican coordinator. When determining the presence of antibodies, their level and specificity shall be determined. Antibody levels shall be expressed as a percentage. Establishing the presence of HLA antibodies in the recipient's blood and determining their specificity shall be carried out to effectively select a donor.

If the recipient received transfusions of blood components, then antibody screening shall be carried out after 14 days from the moment of sensitization of the body (transfusion of blood components). Determination of the level (percentage) of sensitization shall be carried out with the recipient's serum sampled no earlier than 48 hours before the operation.

Determination of the presence of HLA antibodies shall be carried out by EIA (Elisa test) or fluorescence cytometry. In difficult cases, the assessment of sensitization by leukocyte antibodies shall be assessed in the combination of these methods.

In the presence of HLA antibodies in the recipient for the diagnosis of donor-specific antibodies, typing of intravital and (or) the posthumous donor shall be carried out at locus HLA-A, B, C, DRB1, DQB1, DQA, DPB, DPA. Typing shall be carried out by the molecular genetic method at the low-resolution SSP or SSO level.

13. For the final decision on the compatibility of the donor and the recipient in organ transplantation, a cross-match test shall be carried out for all pairs of recipients and the donor.

The "cross-match" test for compatibility shall be performed by the serological method based on the lymphocytotoxic test. A flow cytometric compatibility test shall be performed to confirm serological results.

The primary "cross-match" shall be carried out to determine compatible related donors at the stage of selection from among living donors, as well as with archived serum of recipients in transplantation from a posthumous donor.

Before the operation, an actual "cross-match" shall be placed with the serum sampled within 48 hours before the operation and is mandatory for selection among intravital and (or) posthumous donors.

To determine the predicted compatibility of the donor and recipient, the transplant doctor shall compare the results of typing of the donor and the recipient, taking into account the results of HLA antibodies and the test for cross-match compatibility.

Organ transplantation shall be carried out based on a negative result of the actual "cross-match".

Footnote. Clause 13 in the wording of the Order of the Minister of Health of the Republic of Kazakhstan dated 30.09.2021 No. КР ДСМ -101 (shall be enforced upon expiry of ten calendar days after the date of its first official publication).

14. To determine the immunological compatibility in recipients and donors in liver transplantation from the intravital donor and in the liver, heart, and heart-lung organ complex transplantation from a posthumous donor, recipients are tested for the presence of HLA antibodies in the direction of a hospital transplant doctor and (or) republican coordinator.

If HLA antibodies are present, their level and specificity shall be determined according to the procedure and methods specified in paragraph 12 of these Rules.

In the absence of leukocyte antibodies, HLA typing of the recipient and the donor, as well as a cross-match test, is not necessary.

In the presence of leukocyte antibodies to recipients and their donors, HLA-typing and a cross-match test for compatibility shall be carried out in accordance with the order specified in paragraphs 11 and 13 of these Rules.

15. Recipients who have undergone transplantation of an organ (part of an organ) from a posthumous or intravital donor, upon referral of a specialized professional or a PHC specialist, shall be tested for the presence of HLA antibodies by fluorescence cytometry with the following frequency:

on the 14th day after transplantation;

one month after transplantation;

in the first year, every 3 months after transplantation;

in case of negative status, once a year;

with a positive status, every 3 months.

To establish donor-specific antibodies, additional donor typing shall be carried out at loci HLA-A, B, C, DRB1, DQB1, DQA, DPB, DPA for the diagnosis of donor-specific antibodies upon referral of a hospital transplant doctor of the transplantation center, a specialized professional or a PHC specialist. Typing shall be carried out at a low-resolution level by the molecular genetic method SSP or SSO. If it is necessary to confirm the results obtained at the low-resolution level, high-level typing (SBT) shall be performed.

The presence of donor-specific antibodies shall be is an early marker of transplant rejection. In the presence of donor-specific antibodies in the results obtained, the level shall be corrected with immunosuppressive drugs.

Footnote. Clause 15 in the wording of the Order of the Minister of Health of the Republic of Kazakhstan dated 30.09.2021 No. КР ДСМ -101 (shall be enforced upon expiry of ten calendar days after the date of its first official publication).

Paragraph 2. Procedure for determining immunological compatibility in potential recipients included in the register

Footnote. The title of Paragraph 2 in the wording of the Order of the Minister of Health of the Republic of Kazakhstan dated 30.09.2021 No. КР ДСМ -101 (shall be enforced upon expiry of ten calendar days after the date of its first official publication).

16. To determine immunological compatibility in potential recipients included in the register, blood sampling for an HLA study shall be carried out based upon a referral from a specialized professional or a PHC specialist.

Blood sampling shall be carried out according to the schedule in the regional blood centers and/or polyclinics at the place of residence, except for recipients on dialysis. For dialysis recipients, blood is drawn at dialysis centers.

The provision of consumables for blood collection and delivery of blood samples to the HLA laboratories shall be carried out by the regional blood center.

Footnote. Clause 16 as amended by the Order of the Minister of Healthcare of the Republic of Kazakhstan dated 30.09.2021 No. КР ДСМ -101 (shall be enforced upon expiry of ten calendar days after the date of its first official publication).

17. For potential recipients included in the register, the HLA phenotype is determined. Recipients are typed at loci A and B of class I and locus DRB1 of class II. Typing shall be carried out by the molecular genetic method at a low-resolution level (SSP or SSO). When a living donor appears, the recipient who is in the register undergoes confirmation typing from a new blood sample.

For a posthumous donor, typing is performed at loci HLA-A, B, and DRB1 by a molecular genetic method and at low-resolution level (SSP or SSO) upon the referral of the republican transplant coordinator.

Information about the recipient's HLA phenotype shall be included in the medical information system.

Footnote. Clause 17 in the wording of the Order of the Minister of Health of the Republic of Kazakhstan dated 30.09.2021 No. КР ДСМ -101 (shall be enforced upon expiry of ten calendar days after the date of its first official publication).

18. When included in the register or preparing for related transplantation, the potential recipients in need of organ (part of organ) transplantation shall be determined for the presence of leukocyte antibodies upon referral of a transplant doctor or a specialized professional (in his absence, a local therapist or general practitioner).

In the future, for persons included in the register, the presence of HLA antibodies shall be determined at a rate of once every three months. If antibodies are present, their level and specificity shall be determined. The level of HLA antibodies shall be expressed as a percentage. Determination of the presence of HLA antibodies shall be carried out by EIA (Elisa test) or fluorescence cytometry. In difficult cases, the assessment of sensitization by leukocyte antibodies is assessed in the combination of these methods.

Information on the level of sensitization expressed as a percentage shall be included in the medical information system.

Footnote. Clause 18 in the wording of the Order of the Minister of Health of the Republic of Kazakhstan dated 30.09.2021 No. КР ДСМ -101 (shall be enforced upon expiry of ten calendar days after the date of its first official publication).

19. When a posthumous donor appears, a "cross-match" primary test for compatibility with a blood sample of potential recipients shall be carried out, sampled by the medical information system upon referral of the republican coordinator.

The actual "cross-match" test for compatibility shall be carried out upon the referral of the transplant doctor at the transplant center. Organ transplantation shall be carried out based on a negative result of the actual "cross-match".

Footnote. Clause 19 in the wording of the Order of the Minister of Health of the Republic of Kazakhstan dated 30.09.2021 No. КР ДСМ -101 (shall be enforced upon expiry of ten calendar days after the date of its first official publication).

Paragraph 3. Procedure for determining immunological compatibility in recipients and donors during hematopoietic stem cells (bone marrow) transplantation

20. To determine the immunological compatibility in recipients and donors during hematopoietic stem cells (bone marrow) transplantation, the staff of the HLA-laboratory shall carry out an initial determination of the histocompatibility of the recipient and his potential donors for locus A, B, and C of class I and locus DRB1, DQB1 of class II at the low-resolution level by the molecular genetic method (SSP or SSO) in the direction of a hematologist.

To determine the final histocompatibility at the indicated locus, confirmatory typing of the recipient and the selected donor shall be carried out by the molecular genetic method at a high level of resolution (SBT/NGS) from a new blood sample on the referral of a hematologist.

The determination of the predicted compatibility of the donor and the recipient shall be carried out by the hematologist by comparing the results of typing of the donor and the recipient.

21. For the diagnosis of donor-specific antibodies, the recipient is determined by the percentage of sensitization and (or) the specificity of HLA antibodies by fluorescence cytometry.

22. For recipients who do not have related donors, the National Register of Hematopoietic Stem Cell Donors (hereinafter referred to as the Register) shall be formed.

In persons who have expressed a desire to enter the Register, the HLA phenotype is determined by locus A, B and C of class I and locus DRB1, DQB1 of class II by a molecular genetic method at a high level of resolution (SBT/NGS) in the direction of specialists from the National Register.

If, as a result of a search in the Register, a donor is found that matches the genotype of a potential recipient, after obtaining the consent of the donor for a donation of hematopoietic stem cells, confirmatory typing with a high-resolution molecular genetic method (SBT/NGS) from a new blood sample is performed.

Information on the HLA phenotype of potential donors is included in the Register's electronic database.

Maintaining the Register of Hematopoietic Stem Cells Donors (bone marrow) shall be carried out in accordance with subparagraph 1) of Article 215 of the Code.

23. For recipients in need of stem cell transplantation, a cord blood bank is formed and, at the request of a hematologist, cord blood doses compatible with the HLA phenotype are selected.

HLA typing of umbilical cord blood shall be carried out at locus A, B, and DRB1 by the molecular genetic method at a low level of resolution (SSP/SSO) in the direction of the specialists of the cord blood bank.

Information about the HLA phenotype of the umbilical cord blood is transmitted to the specialists of the cord blood bank.

24. For recipients who underwent transplantation of hematopoietic stem cells, donor chimerism is determined in the direction of a hematologist to determine the degree of graft engraftment and predict the recurrence of the underlying disease.

Determination of donor chimerism shall be carried out by the molecular genetic method by carrying out fragment analysis of STR locus and (or) real-time PCR.

To determine donor chimerism in recipients after hematopoietic stem cell transplantation, the recipient's blood samples taken before and after the transplantation, and the donor's blood sample are used.

The result is expressed as a percentage of the presence of donor genes in the recipient's blood sample.

25. For recipients with immunological refractoriness and the presence of leukocyte antibodies, the employees of the HLA-laboratory carry out an individual selection of platelets.

At high percentages of sensitization of leukocyte antibodies in the recipient's blood, the recipient is typed at locus A, B and C of class I and locus DRB1, DQB1 of class II at a low-resolution level by the molecular genetic method (SSP or SSO) to search for a suitable blood donor by the HLA phenotype.

The base of HLA-typed blood donors is created for locus A, B and C of the I class of the HLA-system at a low-resolution level using the serological method.

Individual selection of blood components shall be carried out based on the "cross-match" lymphocytotoxic test with the recipient's serum and the donor's blood sample having the same antigens of the A, B and C locus of the I class of the HLA system. In the absence of a blood donor with the same HLA phenotype, an individual selection of platelets shall be carried out based on a lymphocytotoxic test "cross-match" without taking into account the donor's HLA phenotype.

For transfusion, platelets are given with a negative result of individual selection of blood components based on the lymphocytotoxic test "cross-match".

With a high sensitization of the recipient with leukocyte antibodies (above 50%), doses of platelets with the lowest level of cytotoxicity of the lymphocytotoxic test (2+ or 4+) are transfused.

In the absence of a donor with a negative and low level of cytotoxicity of the lymphocytotoxic test, platelet transfusion shall be carried out from donors with a large number of matches for antigens of locus A, B and C of class I of the HLA system.

Appendix to the Rules for determining the immunological compatibility of tissues during transplantation of organs (part of an organ) and (or) tissues (part of tissue)

List of studies for immunological compatibility of tissues
during organ transplantation (part of an organ) and (or) tissues (part of a tissue)

Footnote. The list in the wording of the Order of the Minister of Health of the Republic of Kazakhstan dated 30.09.2021 No. КР ДСМ -101 (shall be enforced upon expiry of ten calendar days after the date of its first official publication).

Study name	Recipient and/or donor	Sample amount (ml)	Sample name, presence of filler	Study type
Immunological compatibility in recipients and donors during organ transplantation from an intravital and (or) posthumous donor
Phenotyping of blood according to the HLA system by the serological method (class I antigens-Loci A, B, C) low resolution	Recipient	5-9	Blood, lithium anticoagulant-heparin	Serological
	Organ donor	5-9		Serological
Testing for compatibility "cross match"	Recipient	5-9	Blood, gel, and coagulation activator	Serological
	Organ donor	5-9	Blood, lithium anticoagulant-heparin	Serological
Blood genotyping by the HLA-system using the SSP method antigens class I and II, loci A, B, DRB1 medium resolution	Recipient	5-9	Blood, anticoagulant K2EDTA	Molecular genetic
	Organ donor	5-9	Blood, anticoagulant K2EDTA	Molecular genetic
Determination of the level of sensitization - the percentage of HLA antibodies in a serum sample by EIA (Elisa test)	Recipient	5-9	Blood, gel, and coagulation activator	EIA
Determination of the presence of HLA antibodies in a serum sample by flow fluorometry	Recipient	5-9	Blood, gel, and coagulation activator	Flow cytometry
Determination of the specificity of HLA antibodies of class 1 and 2 in a serum sample by flow fluorometry	Recipient	5-9	Blood, gel, and coagulation activator	Flow cytometry
Determination of the percentage of serum sensitization by HLA antibodies by flow cytometry	Recipient	5-9	Blood, gel, and coagulation activator	Flow cytometry
Blood genotyping for HLA-A, B, C, DRB1, DQB1/DQA1, DPB1/DPA1 genes by PCR-SSP method	Recipient and (or) donor	5-9	Blood, anticoagulant K2EDTA	Molecular genetic
Individual selection of platelets for leukocyte antigens in recipients with platelet refractoriness
Individual selection of blood components based on the "cross match" lymphocytotoxic test ч"	Recipient	5-9	Blood, gel, and coagulation activator	Serological
	Donor of blood and its components	8-9	Blood, lithium anticoagulant-heparin	Serological
Determination of immunological compatibility in recipients and donors during hematopoietic stem cell transplantation from related donors
Blood genotyping by the HLA system using the SSP method class I and II, loci A, B, C, DRB1, DQB1 medium resolution	Recipient	5-9	Blood, anticoagulant K2EDTA	Molecular genetic
	HSC donor	5-9		Molecular genetic
Determination of genes of the major histocompatibility complex at loci A, B, C, DRB1, DRQB1 with division into haplotypes by the SBT (High resolution) method	Recipient	5-9	Blood, anticoagulant K2EDTA	Molecular genetic
	HSC donor	5-9		Molecular genetic
Определение генов HLA - А, В, С, DRB1, DQA1/DQB1, DPB1/DPA1 на высоком разрешении методом NGS	HSC donor	5-9	Blood, anticoagulant K2EDTA	Molecular genetic
Determination of immunological compatibility in potential donors of hematopoietic stem cells included in the National Register of donors of hematopoietic stem cells and umbilical cord blood banks
Typing of HLA-A, B, C, DRB1, DQB1 genes without division into haplotypes (high resolution) by molecular genetic method	HSC donor для вступления в Регистр ГСК	8-9	Blood, anticoagulant K2EDTA	Molecular genetic
Determination of HLA genes - A, B, C, DRB1, DQA1 / DQB1, DPB1 / DPA1 at high resolution using the NGS method	HSC donor	8-9	Blood, anticoagulant K2EDTA	Molecular genetic
Blood genotyping by the HLA-system using the SSP method antigens class I and II, loci A, B, DRB1 medium resolution	Samples of umbilical cord blood	1-2	-	Molecular genetic
Conducting immunological compatibility in recipients included in the register
Determination of antigens of loci HLA-A, B, DR by flow cytometry	Recipient and (or) donor	8-9	Blood, anticoagulant K2EDTA	Molecular genetic
Determination of the presence of HLA antibodies in a serum sample by flow fluorometry	Recipient	8-9	Blood, gel, and coagulation activator	Flow cytometry
Determination of the percentage of serum sensitization by HLA antibodies by flow cytometry	Recipient	8-9	Blood, gel, and coagulation activator	Flow cytometry
Determination of donor chimerism in recipients after transplantation of hematopoietic stem cells (bone marrow)
Determination of chimerism in a patient after transplantation of hematopoietic stem cells by capillary sequencing	Recipient (blood sample before and after transplantation)	5-9	Blood, anticoagulant K2EDTA	Molecular genetic
	HSC donor	5-9	Blood, anticoagulant K2EDTA	Molecular genetic

Annex 2 to the order

The Regulation on the HLA-laboratory activities

Chapter 1. General Provisions

1. This Regulation on the HLA-laboratory activities has been developed in accordance with paragraph 2 of Article 211 of the Code of the Republic of Kazakhstan dated July 7, 2020 "On public health and healthcare system" (hereinafter referred to as the Code) and shall determine the regulation on the HLA-laboratory activities.

2. HLA - laboratories function as a structural subdivision of organizations carrying out activities in the field of donation, procurement of blood, its components, and preparations.

3. HLA – laboratories shall include:

1) central laboratory for immunological typing of tissues (parts of tissues) and (or) organs (parts of organs) (hereinafter referred to as the Central laboratory), which is created under the republican state medical organization carrying out scientific activities and activities in the field of donation, preparation of blood, its components and drugs;

2) local laboratory for immunological typing of tissues (parts of tissues) and (or) organs (parts of organs) (hereinafter referred to as a Local laboratory), which is created under state medical organizations operating in the field of donation, preparation of blood, its components and preparations in the areas and cities of republican significance.

4. In their work, HLA laboratories shall be guided by the Constitution of the Republic of Kazakhstan, the Code of the Republic of Kazakhstan "On public health and healthcare system", this Regulation, Orders of the Ministry of Healthcare of the Republic of Kazakhstan, regulating the issues of immunological examination of donors and recipients during tissue (part of tissue) transplantation and (or) organs (parts of organs).

5. HLA – laboratories shall carry out activities on the issues of immunological examination of donors and recipients during transplantation of tissues (parts of tissues) and (or) organs (parts of organs) around the clock.

Chapter 2. Tasks of HLA-laboratories

6. The main tasks of the HLA laboratory shall be:

1) central laboratory:

organizational and methodological management of local laboratories;

advice to local laboratories;

scientific activity on the study of human leukocyte antigens (hereinafter referred to as HLA);

educational activities on the issues of immunological examination of donors and recipients during transplantation of tissues (parts of tissues) and (or) organs (parts of organs);

provision of all types of immunological research of recipients and their donors for organizations carrying out organ transplantation (part of an organ) and (or) tissues (part of tissue);

conducting an immunological examination of recipients on the waiting list of the supervised region;

conducting expert laboratory studies on immunological examination of donors and recipients during tissue transplantation (parts of tissues) and (or) organs (parts of organs) for local laboratories in case of controversial and complex cases;

2) local laboratory:

provision of all types of immunological research of recipients and their donors for organizations carrying out organ transplantation (part of an organ) and (or) tissues (part of tissue);

conducting an immunological examination of recipients on the waiting list of the supervised region;

organization of the collection of sera from recipients in need of transplantation of tissues (parts of tissues) and (or) organs (parts of organs) (hereinafter referred to as recipients);

HLA studies for immunological control over the engraftment of transplanted organs and tissues.

Chapter 3. Functions of HLA-laboratories

7. In accordance with the assigned tasks, the HLA-laboratories shall carry out the following functions:

1) conducting HLA studies in recipients and donors in kidney and pancreas transplantation from an intravital and (or) posthumous donor;

2) carrying out HLA studies in recipients and donors during transplantation of other organs (liver, heart, and others) of an intravital and (or) posthumous donor;

3) carrying out HLA-typing of recipients and donors in the transplantation of hematopoietic stem cells (bone marrow) from related donors;

4) conducting HLA studies in recipients included in the waiting list of the supervised region;

5) HLA-typing of potential donors for the formation of the Register of hematopoietic stem cells and cord blood donors for the formation of the cord blood bank;

6) setting a test for compatibility "cross-match" between donor and recipient during organ transplantation;

7) determination of donor chimerism in recipients after transplantation of hematopoietic stem cells (bone marrow);

8) conducting post-transplant monitoring of HLA antibodies in recipients who underwent organ (tissue) transplantation;

9) implementation of individual selection of platelets for recipients based on the HLA phenotype, if necessary.

8. Organizational and methodological leadership and scientific functions of the Central Laboratory:

1) coordination of the activities of Local Laboratories for the collection of sera from recipients in need of organ transplantation for the determination of preexisting antibodies and a test for cross-match compatibility;

2) implementation of organizational and methodological management of Local Laboratories in terms of collection, screening, preparation of antileukocyte sera and immunological typing of blood to identify correlations with various diseases in population scientific research;

3) monitoring and analysis of the activities of Local laboratories;

4) formation of the main directions for improving the methods used in tissue typing;

5) planning and coordination of training for tissue typing laboratories of the republic, participation in training for specialists of Local Laboratories;

6) carrying out scientific work on the study of the prevalence of HLA-phenotypes in the Kazakh population, the relationship of the studied HLA-phenotypes with various types of diseases, studies of the human genome;

7) study and transfer of new research methods to the practice of immunological typing laboratories of the republic;

8) introduction of immunogenetic and genomic studies into the practice of medical organizations in the diagnosis of various pathological conditions, assessment and prediction of the effectiveness of treatment, the formation of risk groups among the population to organize preventive measures to prevent several diseases, conduct population studies;

9) development of a plan and program of international cooperation in the field of tissue typing, participation in international workshops, exchange of anti-HLA sera with foreign laboratories to improve test reagents, methods of tissue typing;

10) researching external assessment of quality and conducting interlaboratory comparative tests.

9. Organizational and advisory functions of the Local laboratory:

1) participation in the preparation of plans to improve the qualifications of employees of a healthcare organization on issues of immunological tissue typing;

2) organization of explanatory work on the clinical significance of immunological studies;

3) submission of reports on the work done to the Central Laboratory.

10. The structure and staffing standards of the Central Laboratory shall be determined in accordance with the legislation of the Republic of Kazakhstan.

11. The local laboratory shall be headed by a person who has undergone specialization in the Central laboratory for immunological typing of tissues (parts of tissues) and (or) organs (parts of organs), appointed to the position in the manner prescribed by law.

Об утверждении правил определения иммунологической совместимости тканей при трансплантации органов (части органа) и(или) тканей (части ткани) и положения о деятельности HLA-лаборатории

Приказ и.о. Министра здравоохранения Республики Казахстан от 27 октября 2020 года № ҚР ДСМ-159/2020. Зарегистрирован в Министерстве юстиции Республики Казахстан 29 октября 2020 года № 21528.

В соответствии с пунктом 2 статьи 211 Кодекса Республики Казахстан от 7 июля 2020 года "О здоровье народа и системе здравоохранения" ПРИКАЗЫВАЮ:

1. Утвердить:

1) правила определения иммунологической совместимости тканей при трансплантации органов (части органа) и(или) тканей (части ткани) согласно приложению 1 к настоящему приказу;

2) положение о деятельности HLA-лаборатории согласно приложению 2 к настоящему приказу.

2. Признать утратившим силу Приказ Министра здравоохранения Республики Казахстан от 8 апреля 2019 года № ҚР ДСМ-21 "Об утверждении Положения об HLA-лаборатории" (зарегистрирован в Реестре государственной регистрации нормативных правовых актов под № 18479, опубликован 16 апреля 2019 в Эталонном контрольном банке нормативных правовых актов Республики Казахстан в электронном виде).

3. Департаменту организации медицинской помощи Министерства здравоохранения Республики Казахстан в установленном законодательством Республики Казахстан порядке обеспечить:

1) государственную регистрацию настоящего приказа в Министерстве юстиции Республики Казахстан;

2) размещение настоящего приказа на интернет-ресурсе Министерства здравоохранения Республики Казахстан;

3) в течение десяти рабочих дней со дня государственной регистрации настоящего приказа в Юридический департамент Министерства здравоохранения Республики Казахстан сведений об исполнении мероприятий, предусмотренных подпунктами 1) и 2) настоящего пункта.

4. Контроль за исполнением настоящего приказа возложить на вице-министра здравоохранения Республики Казахстан Гиният А.

5. Настоящий приказ вводится в действие по истечении десяти календарных дней после дня его первого официального опубликования.

Исполняющий обязанности Министра здравоохранения Республики Казахстан

М. Шоранов

Приложение 1 к приказу Исполняющего обязанности Министра здравоохранения Республики Казахстан от 27 октября 2020 года № ҚР ДСМ-159/2020

Правила определения иммунологической совместимости тканей при трансплантации органов (части органа) и(или) тканей (части ткани)

Глава 1. Общие положения

1. Настоящие Правила определения иммунологической совместимости тканей при трансплантации органов (части органа) и(или) тканей (части ткани) (далее – Правила) разработаны в соответствии с пунктом 2 статьи 211 Кодекса Республики Казахстан от 7 июля 2020 года "О здоровье народа и системе здравоохранения" (далее – Кодекс) и определяют порядок определения иммунологической совместимости тканей при трансплантации органов (части органа) и(или) тканей (части ткани).

2. В настоящих Правилах используются следующие понятия:

1) аллель – различные формы одного и того же гена, расположенные в одинаковых участках (локусах) парных хромосом;

2) антигены – молекулы гликопротеинов, расположенные на поверхности клеточной мембраны лейкоцитов, отвечающие за распознавание чужеродных агентов;

3) гемопоэтические стволовые клетки – кроветворные клетки костного мозга человека, обладающие полипотентностью и находящиеся в процессе жизни в костном мозге, периферической крови и пуповинной крови;

4) регистр доноров гемопоэтических стволовых клеток (костного мозга) – перечень лиц, согласных на безвозмездное донорство гемопоэтических стволовых клеток (костного мозга) и типированных по системе-НLА;

5) гены – участки хромосом, кодирующие структуру и функции антигенов;

6) тканевая совместимость – сходство тканей донора и потенциального реципиента по специфическим антигенам системы-HLA, определяющее совместимость донора и реципиента при трансплантации органов (части органа) и(или) тканей (части ткани);

7) локус – линейный участок хромосомы, занимаемый одним геном;

8) секвенирование нуклеиновых кислот — определение их первичной аминокислотной или нуклеотидной последовательности;

9) сенсибилизация – приобретение организмом специфической повышенной чувствительности к чужеродным антигенам;

10) солидные органы – все плотные органы организма, такие как почки, сердце, легкие, печень, поджелудочная железа;

11) HLA-исследования – комплекс лабораторных исследований проводимые для определения иммунологической совместимости тканей при трансплантации органов (части органа) и(или) тканей (части ткани);

12) HLA-система – система антигенов, расположенная на лейкоцитах человека и определяющая тканевую совместимость донора и реципиента при трансплантации органов и тканей, а также гемопоэтических стволовых клеток;

13) HLA-фенотип – индивидуальные иммунологические параметры человека, кодируемые генетически;

14) фрагментный анализ – определение размера фрагментов ДНК и(или) интенсивности флуоресценции меченых фрагментов ДНК;

15) STR-локусы – молекулярные маркеры в генетических и геномных исследованиях, которые являются варьирующими участками в ядерной ДНК, состоящие из повторяющихся мономеров;

16) профильный специалист – медицинский работник с высшим медицинским образованием, имеющий сертификат по определенной специальности;

17) республиканский трансплантационный координатор – врач, обеспечивающий координацию работы региональных трансплантационных координаторов и эффективное межведомственное взаимодействие медицинских организаций по вопросам службы трансплантации в Республике Казахстан, являющийся штатным сотрудником Координационного центра;

18) региональный трансплантационный координатор – врач, обеспечивающий межведомственное взаимодействие медицинских организаций в области трансплантации органов (части органа) и (или) тканей (части ткани) в областных центрах, городах республиканского значения и столице, являющийся штатным сотрудником Координационного центра;

19) стационарный трансплантационный координатор – врач, являющийся штатным сотрудником донорской организации и находящийся в подчинении регионального трансплантационного координатора по вопросам координации службы трансплантации в соответствующей области, городе республиканского значения, столице;

20) регистр потенциальных реципиентов органов (части органа) и (или) тканей (части ткани) (далее – регистр) - база данных потенциальных реципиентов органов (части органа) и (или) тканей (части ткани);

21) медицинская информационная система – информационная система, обеспечивающая ведение процессов субъектов здравоохранения в электронном формате;

22) метод SSP – типирование методом полимеразно-цепной реакции с использованием сиквенс-специфических праймеров;

23) метод SBT – типирование методом секвенирования нуклеиновых кислот путем определения нуклеотидной последовательности дезоксирибонуклеиновой кислоты;

24) метод SSO – типирование методом полимеразно-цепной реакции, с использованием флуоресцентно-меченных микросфер, несущих на поверхности сиквенс-специфические олигонуклеидные зонды;

25) метод NGS – это секвенирование следующего (или) нового поколения для определения нуклеотидной последовательности ДНК и РНК с целью получения описания еҰ первичной структуры;

26) метод ИФА – определение лейкоцитарных антител постановкой иммуноферментного анализа;

27) метод флуоресцентной цитометрии – определение лейкоцитарных антител с использованием флуоресцентно-меченых микросфер, несущих на поверхности лейкоцитарные антигены.

Сноска. Пункт 2 с изменениями, внесенными приказом Министра здравоохранения РК от 30.09.2021 № КР ДСМ -101 (вводится в действие по истечении десяти календарных дней после дня его первого официального опубликования).

Глава 2. Порядок определения иммунологической совместимости тканей при трансплантации органов (части органа) и(или) тканей (части ткани)

3. Определение иммунологической совместимости тканей при трансплантации органов (части органа) и(или) тканей (части ткани) проводится:

1) для потенциальных реципиентов и их доноров при трансплантации органов (части органа) от прижизненного и (или) посмертного донора;

2) для потенциальных реципиентов, не имеющих прижизненного донора и включенных в регистр;

3) для реципиентов и доноров при трансплантации гемопоэтических стволовых клеток.

Сноска. Пункт 3 - в редакции приказа Министра здравоохранения РК от 30.09.2021 № КР ДСМ -101 (вводится в действие по истечении десяти календарных дней после дня его первого официального опубликования).

4. Определение иммунологической совместимости реципиента и донора осуществляется на основании предоставленных в HLA-лабораторию:

1) гражданами Республики Казахстан, получающих услуги по трансплантации на территории Республики Казахстан в рамках гарантированного объема бесплатной медицинской помощи, направления из центра трансплантации Республики Казахстан, где планируется оказание услуг по трансплантации;

2) лицами, не являющимися гражданами Республики Казахстан и получающих услуги по трансплантации на территории Республики Казахстан в рамках договора, заключенного с центрами трансплантации, направления из данных центров трансплантации;

3) лицами, не являющимися гражданами Республики Казахстан, выступающих в качестве потенциального прижизненного донора для гражданина Республики Казахстан, получающего услуги по трансплантации на территории Республики Казахстан в рамках гарантированного объема бесплатной медицинской помощи, направления из центра трансплантации Республики Казахстан, где планируется оказание услуг по трансплантации;

4) лицами, не являющимися гражданами Республики Казахстан и не получающих услуги по трансплантации солидных органов на территории Республики Казахстан, в рамках возмездного договора с лабораторией, направления оформленного на официальном бланке уполномоченного органа в области здравоохранения страны, гражданином которой является потенциальный живой донор и(или) реципиент;

5) лицами, не являющимися гражданами Республики Казахстан и не получающих услуги по трансплантации гемопоэтических стволовых клеток на территории Республики Казахстан, в рамках возмездного договора с лабораторией, направления оформленного на официальном бланке уполномоченного органа в области здравоохранения страны, гражданином которой является пациент и(или) его потенциальный живой донор, и(или) зарубежного центра трансплантации;

6) лицами, являющимися гражданами Республики Казахстан, планирующих получение возмездной услуги по трансплантации солидного органа в зарубежной клинике, в рамках возмездного договора с лабораторией, направления оформленного на официальном бланке указанной клиники или центра трансплантации Республики Казахстан, заключенного с реципиентом и(или) донором;

7) лицами, являющимися гражданами Республики Казахстан, планирующих получение возмездной услуги по трансплантации гемопоэтических стволовых клеток в зарубежной клинике, в рамках возмездного договора с лабораторией на основании направления оформленного на официальном бланке указанной клиники или центра трансплантации Республики Казахстан;

8) лицами, являющимися гражданами Республики Казахстан, получающих услуги по трансплантации солидного органа или гемопоэтических стволовых клеток в зарубежной клинике в рамках программы "Лечение за рубежом", в рамках гарантированного объема бесплатной медицинской помощи, направления уполномоченного органа в области здравоохранения или центра трансплантации Республики Казахстан.

5. В официальном бланке медицинской организации указываются:

Ф.И.О (при наличии), дата рождения, гражданство, национальность, группа крови и резус-принадлежность, адрес проживания реципиента и его потенциального прижизненного донора (доноров);

информация о диагнозе реципиента;

гемотрансфузионный, акушерский и трансплантационный анамнезы реципиента;

планируемый вид оперативного вмешательства;

информация о лечащем враче и его контакты для передачи результатов.

6. После подтверждения направления осуществляется забор образцов крови для проведения HLA-исследований по определению иммунологической совместимости тканей при трансплантации органов (части органа) и(или) тканей (части ткани).

7. Перед забором крови на пробирке указываются Ф.И.О (при наличии) и дата рождения реципиента и(или) донора, группа крови и резус-принадлежность, дата и время забора.

Забор образца крови у реципиента и(или) донора производится из вены в соответствующую вакуумную пробирку согласно приложению 1 к настоящим Правилам. Для HLA-типирования молекулярно-генетическим методом забор крови не проводится из фистульной вены, а также у реципиентов, получающих гепаринсодержащие препараты и после процедуры гемодиализа.

После заполнения пробирки с кровью аккуратно перемешиваются путем 8-10-кратного переворачивания пробирки.

Образцы крови сопровождаются направлением с обязательным заполнением всех граф согласно документу, удостоверяющему личность реципиента и(или) донора и заверенного печатью или штампом направляющей организации (врача). В случае, если реципиент и(или) донор не достиг 18-ти лет, то прилагается копия свидетельства о рождении.

8. Транспортировка образцов крови осуществляется при температуре от +2 °С до +8 °С в защищенных от света термоконтейнерах (сумка-холодильник) с теплоизолирующими свойствами и плотно прилегающей крышкой. Пробы транспортируются в вертикальном положении в штативах для пробирок. Срок доставки проб составляет 24 часа с момента забора образца крови для серологических анализов и 72 часа для других видов анализов.

9. При наличии гемолиза, перегрева, замораживания или по истечении срока с момента забора образец крови не принимается для исследования.

10. Результаты исследований по определению гистосовместимости, проведенные в зарубежных лабораториях, не признаются действительными для принятия решения о возможности проведения трансплантации в Республике Казахстан.

Результаты HLA-исследований передаются в организацию здравоохранения (лечащему врачу или курьеру, имеющему доверенность или доверенному лицу, указанному в официальном письме) направившую материал для исследований. При передачи результатов исследований используются защищенные интернет-каналы и дополнительная защита файла паролем с соблюдением норм конфиденциальности.

Не допускается передача результатов потенциальному донору или реципиенту, а также их родственникам.

Параграф 1. Порядок определения иммунологической совместимости у реципиентов и доноров при трансплантации органов (части органа) от прижизненного донора и(или) посмертного донора

11. Для определения иммунологической совместимости у реципиентов и доноров при трансплантации почки и поджелудочной железы от прижизненного и(или) посмертного донора сотрудниками HLA-лаборатории проводится первичное определение гистосовместимости по локусам А, В и Сw I класса и локусу DRB1 II класса HLA-системы. Для определения гистосовместимости проводится типирование прижизненного донора и реципиента по указанным локусам.

Первичное типирование осуществляется серологическим методом на низкоразрешающем уровне локусов А, В и Сw I класса. Проводится подтверждающее типирование А, В и DRB1 локусов реципиента и подобранного донора молекулярно-генетическим методом на низкоразрешающем уровне методом SSP или SSO из нового образца крови.

Дважды определенный результат типирования, полученный с использованием двух разных образцов крови в лабораториях иммунологического типирования, определенных в соответствии с законодательством Республики Казахстан, является окончательным.

12. Реципиенты, нуждающиеся в трансплантации органа (ткани), проверяются на наличие HLA-антител по направлению врача-трансплантолога стационара и(или) республиканского координатора. При установлении наличия антител определяется их уровень и специфичность. Уровень антител выражается в процентах. Установление наличия в крови реципиента HLA-антител и определение их специфичности осуществляется с целью эффективного подбора донора.

Если реципиенту проводились переливания компонентов крови, то скрининг антител проводится после 14 дней от момента сенсибилизации организма (переливания компонентов крови). Определение уровня (процента) сенсибилизации проводится с сывороткой реципиента, отобранной не ранее чем за 48 часов до операции.

Определение наличия HLA-антител проводится методом ИФА (Elisa test) или флуоресцентной цитометрии. При сложных случаях оценка сенсибилизации лейкоцитарными антителами оценивается в совокупности указанных методов.

При наличии HLA-антител у реципиента для диагностики донор-специфических антител, типирование прижизненного и(или) посмертного донора проводится по локусам HLA-A, B, C, DRB1, DQB1, DQA, DPВ, DPА. Типирование проводится молекулярно-генетическим методом на низкоразрешающем уровне SSP или SSO.

13. Для окончательного решения вопроса о совместимости донора и реципиента при органной трансплантации для всех пар потенциальных реципиентов и доноров проводится проба на совместимость "кросс-матч".

Проба на совместимость "кросс-матч" выполняется серологическим методом на основе лимфоцитотоксического теста. Для подтверждения результатов, полученных серологическим методом, проводится проба на совместимость методом проточной цитометрии.

Первичный "кросс-матч" проводится для определения совместимых родственных доноров на этапе подбора из числа живых доноров, а также с архивированной сывороткой реципиентов при трансплантации от посмертного донора.

Перед проведением операции ставится актуальный "кросс-матч" с сывороткой, отобранной в течение 48 часов до операции, и является обязательным для подбора среди прижизненных и(или) посмертных доноров.

Для определения прогнозируемой совместимости донора и реципиента врачом-трансплантологом проводится сопоставление результатов типирования донора и реципиента с учетом результатов определения HLA-антител и пробы на совместимость "кросс-матч".

Трансплантация органа осуществляется на основании отрицательного результата актуального "кросс-матча".

Сноска. Пункт 13 - в редакции приказа Министра здравоохранения РК от 30.09.2021 № КР ДСМ -101 (вводится в действие по истечении десяти календарных дней после дня его первого официального опубликования).

14. Для определения иммунологической совместимости у реципиентов и доноров при трансплантации печени от прижизненного донора и при трансплантации печени, сердца и органокомплекса "сердце-легкие" от посмертного донора, реципиенты проверяются на наличие HLA-антител по направлению врача-трансплантолога стационара и(или) республиканского координатора.

При наличии HLA-антител определяется их уровень и специфичность согласно порядку и методами указанные в пункте 12 настоящих Правил.

При отсутствии лейкоцитарных антител HLA-типирование реципиента и донора, а также проведение пробы на совместимость "кросс-матч" не обязательно.

При наличии лейкоцитарных антител реципиентам и их донорам HLA-типирование и проба на совместимость "кросс-матч" проводится согласно порядку, указанному в пунктах 11 и 13 настоящих Правил.

15. Реципиенты, перенесшие трансплантацию органа (части органа) от посмертного или прижизненного донора, по направлению профильного специалиста или специалиста ПМСП проверяются на наличие HLA-антител методом флуоресцентной цитометрии со следующей кратностью:

на 14 день после трансплантации;

через месяц после трансплантации;

в первый год каждые 3 месяца после трансплантации;

при отрицательном статусе 1 раз в год;

при положительном статусе каждые 3 месяца.

Для установления донор-специфических антител проводится дополнительное типирование донора по локусам HLA-A, B, C, DRB1, DQB1, DQA, DPВ, DPА для диагностики донор-специфических антител по направлению врача-трансплантолога центра трансплантации, профильного специалиста или специалиста ПМСП. Типирование проводится на низкоразрешающем уровне молекулярно-генетическим методом SSP или SSO. При необходимости подтверждения результатов, полученных на низкоразрешающем уровне, проводится типирование на высоком уровне (SBT).

Наличие донор-специфических антител является ранним маркером отторжения трансплантата. При наличии в полученных результатах донор-специфических антител проводится коррекция уровня иммуносупрессивными препаратами.

Сноска. Пункт 15 - в редакции приказа Министра здравоохранения РК от 30.09.2021 № КР ДСМ -101 (вводится в действие по истечении десяти календарных дней после дня его первого официального опубликования).

Параграф 2. Порядок определения иммунологической совместимости у потенциальных реципиентов, включенных в регистр

Сноска. Заголовок параграфа 2 - в редакции приказа Министра здравоохранения РК от 30.09.2021 № КР ДСМ -101 (вводится в действие по истечении десяти календарных дней после дня его первого официального опубликования).

16. Для определения иммунологической совместимости у потенциальных реципиентов, включенных в регистр, забор крови для HLA-исследования проводится на основании направления от профильного специалиста или специалиста ПМСП.

Забор крови проводится по графику в региональных центрах крови и(или) поликлиниках по месту жительства, за исключением реципиентов, находящихся на диализе. Реципиентам, получающим диализ, забор крови проводится в диализных центрах.

Обеспечение расходными материалами для забора крови и доставка образцов крови в HLA-лабораторий осуществляется региональным центром крови.

Сноска. Пункт 16 с изменением, внесенным приказом Министра здравоохранения РК от 30.09.2021 № КР ДСМ -101 (вводится в действие по истечении десяти календарных дней после дня его первого официального опубликования).

17. Для потенциальных реципиентов, включенных в регистр, определяется HLA-фенотип. Типирование реципиентов проводится по локусам А и В I класса и локусу DRB1 II класса, молекулярно-генетическим методом на низко разрешающем уровне (SSP или SSO). При появлении прижизненного донора, потенциальному реципиенту, находящемуся в регистре, проводится подтверждающее типирование из нового образца крови.

Для посмертного донора проводится типирование по локусам HLA- А, В и DRB1 молекулярно-генетическим методом на низко разрешающем уровне (SSP или SSO) по направлению республиканского трансплантационного координатора.

Информация об HLA-фенотипе реципиента включается в медицинскую информационную систему.

Сноска. Пункт 17 - в редакции приказа Министра здравоохранения РК от 30.09.2021 № КР ДСМ -101 (вводится в действие по истечении десяти календарных дней после дня его первого официального опубликования).

18. При включении в регистр или подготовке к родственной трансплантации потенциальным реципиентам, нуждающимся в трансплантации органа (части органа), проводится определение наличия лейкоцитарных антител по направлению врача-трансплантолога или профильного специалиста (при его отсутствии, участкового терапевта или врача общей практики).

В дальнейшем для лиц, включенных в регистр, наличие HLA-антител определяется с кратностью один раз в три месяца. При наличии антител определяется их уровень и специфичность. Уровень HLA-антител выражается в процентах. Определение наличия HLA-антител проводится методом ИФА (Elisa test) или флуоресцентной цитометрии. При сложных случаях оценка сенсибилизации лейкоцитарными антителами оценивается в совокупности указанных методов.

Информация об уровне сенсибилизации, выраженной в процентах, включается в медицинскую информационную систему.

Сноска. Пункт 18 - в редакции приказа Министра здравоохранения РК от 30.09.2021 № КР ДСМ -101 (вводится в действие по истечении десяти календарных дней после дня его первого официального опубликования).

19. При выявлении посмертного донора проводится первичная проба на совместимость "кросс-матч" с образцом крови потенциальных реципиентов, отобранных медицинской информационной системой, по направлению республиканского координатора.

Актуальная проба на совместимость "кросс-матч" проводится по направлению врача трансплантолога центра трансплантации. Трансплантация органа осуществляется на основании отрицательного результата актуального "кросс-матча".

Сноска. Пункт 19 - в редакции приказа Министра здравоохранения РК от 30.09.2021 № КР ДСМ -101 (вводится в действие по истечении десяти календарных дней после дня его первого официального опубликования).

Параграф 3. Порядок определения иммунологической совместимости у реципиентов и доноров при трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (костного мозга)

20. Для определения иммунологической совместимости у реципиентов и доноров при трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (костного мозга) сотрудниками HLA-лаборатории проводится первичное определение гистосовместимости реципиента и его потенциальных доноров по локусам А, В и С I класса и локусам DRB1, DQB1 II класса на низкоразрешающем уровне молекулярно-генетическим методом (SSP или SSO) по направлению врача-гематолога.

Для определения окончательной гистосовместимости по указанным локусам проводится подтверждающее типирование реципиента и подобранного донора молекулярно-генетическим методом на высоком уровне разрешения (SBT/NGS) из нового образца крови по направлению врача-гематолога.

Определение прогнозируемой совместимости донора и реципиента проводится врачом-гематологом путем сопоставления результатов типирования донора и реципиента.

21. Для диагностики донорспецифических антител реципиенту проводится определение процента сенсибилизации и(или) специфичности HLA-антител методом флуоресцентной цитометрии.

22. Для реципиентов, не имеющих родственных доноров, формируется Национальный Регистр доноров гемопоэтических стволовых клеток (далее – Регистр).

У лиц, изъявивших желание войти в Регистр, проводится определение HLA-фенотипа по локусам А, В и С I класса и локусам DRB1, DQB1 II класса молекулярно-генетическим методом на высоком уровне разрешения (SBT/NGS) по направлению специалистов Национального Регистра.

Если в результате поиска в Регистре будет найден донор, соответствующий по генотипу потенциальному реципиенту, после получения согласия донора на донацию гемопоэтических стволовых клеток проводится подтверждающее типирование молекулярно-генетическим методом на высоком уровне разрешения (SBT/NGS) из нового образца крови.

Информация об HLA-фенотипе потенциальных доноров включается в электронную базу данных Регистра.

Ведение Регистра доноров гемопоэтических стволовых клеток (костного мозга) осуществляется в соответствии с подпунктом 1) статьи 215 Кодекса.

23. Для реципиентов, нуждающихся в трансплантации стволовых клеток, формируется банк пуповинной крови и по запросу врача-гематолога подбираются совместимые по HLA-фенотипу дозы пуповинной крови.

HLA-типирование пуповинной крови проводится по локусам А, В и DRB1 молекулярно-генетическим методом на низком уровне разрешения (SSP/SSO) по направлению специалистов банка пуповинной крови.

Информация об HLA-фенотипе пуповинной крови передается специалистам банка пуповинной крови.

24. Для реципиентов, перенесших трансплантацию гемопоэтических стволовых клеток, по направлению врача-гематолога определяется донорский химеризм с целью определения степени приживления трансплантата и предсказания рецидива основного заболевания.

Определение донорского химеризма проводится молекулярно-генетическим методом путем проведения фрагментного анализа STR-локусов и (или) ПЦР в режиме реального времени.

Для определения донорского химеризма у реципиентов после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток используются образцы крови реципиента, взятые до и после проведения трансплантации, и образец крови донора.

Результат выражается в процентном соотношении наличия донорских генов в образце крови реципиента.

25. Для реципиентов с иммунологической рефрактерностью и наличием лейкоцитарных антител сотрудниками HLA-лаборатории проводится индивидуальный подбор тромбоцитов.

При высоких процентах сенсибилизации лейкоцитарных антител в крови реципиента проводится типирование реципиента по локусам А, В и С I класса и локусам DRB1, DQB1 II класса на низкоразрешающем уровне молекулярно-генетическим методом (SSP или SSO) для поиска подходящего донора крови по HLA-фенотипу.

База HLA-типированных доноров крови создается по локусам А, В и С I класса HLA-системы на низкоразрешающем уровне серологическим методом.

Индивидуальный подбор компонентов крови проводится на основе лимфоцитотоксического теста "кросс-матч" c сывороткой реципиента и образцом крови донора имеющим совпадение по антигенам локуса А, В и С I класса системы HLA. При отсутствии донора крови с совпадением HLA-фенотипа индивидуальный подбор тромбоцитов проводится на основании лимфоцитотоксического теста "кросс-матч" без учета HLA-фенотипа донора.

К переливанию выдаются тромбоциты с отрицательным результатом индивидуального подбора компонентов крови на основе лимфоцитотоксического теста "кросс-матч".

При высокой сенсибилизации реципиента лейкоцитарными антителами (выше 50%) переливаются дозы тромбоцитов, имеющих самый низкий уровень цитотоксичности лимфоцитотоксического теста (2+ или 4+).

При отсутствии донора с отрицательным и низким уровнем цитотоксичности лимфоцитотоксического теста, переливание тромбоцитов проводится от доноров, имеющих большое количество совпадений по антигенам локусов А, В и С I класса системы HLA.

Приложение к правилам определения иммунологической совместимости тканей при трансплантации органов (части органа) и (или) тканей (части ткани)

Перечень исследований для проведения иммунологической совместимости тканей
при трансплантации органов (части органа) и(или) тканей (части ткани)

Сноска. Перечень - в редакции приказа Министра здравоохранения РК от 30.09.2021 № КР ДСМ -101 (вводится в действие по истечении десяти календарных дней после дня его первого официального опубликования).

Наименование исследования	Реципиент и(или) донор	Количество пробы (мл)	Наименование пробы, наличие наполнителя	Вид исследования
Проведение иммунологической совместимости у реципиентов и доноров при трансплантации органов от прижизненного и(или) посмертного донора
Фенотипирование крови по HLA-системе серологическим методом (антигены класса I-Локусы А,В,С) низкое разрешение	Реципиент	5-9	Кровь, антикоагулянт литии-гепарин	Серологический
	Донор органа	5-9		Серологический
Постановка пробы на совместимость "кросс матч"	Реципиент	5-9	Кровь, гель и активатор свертывания	Серологический
	Донор органа	5-9	Кровь, антикоагулянт литии-гепарин	Серологический
Генотипирование крови по HLA-системе методом SSP антигены класс I и II, локусы А, В, DRB1 среднее разрешение	Реципиент	5-9	Кровь, антикоагулянт К2ЭДТА	Молекулярно-генетический
	Донор органа	5-9	Кровь, антикоагулянт К2ЭДТА	Молекулярно-генетический
Определение уровня сенсибилизации-процента HLA-антител в образце сыворотки методом ИФА (Elisa test)	Реципиент	5-9	Кровь, гель и активатор свертывания	ИФА
Определение наличия HLA-антител в образце сыворотки методом проточной флуорометрии	Реципиент	5-9	Кровь, гель и активатор свертывания	Проточная цитометрия
Определение специфичности HLA-антител 1 и 2 класса в образце сыворотки методом проточной флуорометрии	Реципиент	5-9	Кровь, гель и активатор свертывания	Проточная цитометрия
Определение процента сенсибилизации сыворотки HLA-антителами методом проточной цитометрии	Реципиент	5-9	Кровь, гель и активатор свертывания	Проточная цитометрия
Генотипирование крови по генам HLA-А, В, С, DRB1, DQB1/DQА1, DPB1/DPA1 методом ПЦР-SSP	Реципиент и(или) донор	5-9	Кровь, антикоагулянт К2ЭДТА	Молекулярно-генетический
Индивидуальный подбор тромбоцитов по лейкоцитарным антигенам реципиентам с рефрактерностью к тромбоцитам
Индивидуальный подбор компонентов крови на основе лимфоцитотоксического теста "кросс -матч"	Реципиент	5-9	Кровь, гель и активатор свертывания	Серологический
	Донор крови и ее компонентов	8-9	Кровь, антикоагулянт литии-гепарин	Серологический
Определение иммунологической совместимости у реципиентов и доноров при трансплантации гемопоэтических стволовых клеток от родственных доноров
Генотипирование крови по HLA-системе методом SSP класс I и II, локусы А, В, С, DRB1, DQB1 среднее разрешение	Реципиент	5-9	Кровь, антикоагулянт К2ЭДТА	Молекулярно-генетический
	Донор ГСК	5-9		Молекулярно-генетический
Определение генов главного комплекса гистосовместимости по локусам А,В,С,DRB1, DRQB1 с разделением на гаплотипы методом SBT (High resolution)	Реципиент	5-9	Кровь, антикоагулянт К2ЭДТА	Молекулярно-генетический
	Донор ГСК	5-9		Молекулярно-генетический
Определение генов HLA - А, В, С, DRB1, DQA1/DQB1, DPB1/DPA1 на высоком разрешении методом NGS	Донор ГСК	5-9	Кровь, антикоагулянт К2ЭДТА	Молекулярно-генетический
Определение иммунологической совместимости у потенциальных доноров гемопоэтических стволовых клеток включенных в Национальный Регистр доноров гемопоэтических стволовых клеток и банки пуповинной крови
Типирование генов HLA-А, В, С, DRB1, DQB1 без разделения на гаплотипы (высокое разрешение) молекулярно-генетическим методом	Донор ГСК для вступления в Регистр ГСК	8-9	Кровь, антикоагулянт К2ЭДТА	Молекулярно-генетический
Определение генов HLA - А, В, С, DRB1, DQA1/DQB1, DPB1/DPA1 на высоком разрешении методом NGS	Донор ГСК	8-9	Кровь, антикоагулянт К2ЭДТА	Молекулярно-генетический
Генотипирование крови по HLA-системе методом SSP антигены класс I и II, локусы А, В, DRB1 среднее разрешение	Образцы пуповинной крови	1-2	-	Молекулярно-генетический
Проведение иммунологической совместимости у реципиентов, включенных в регистр
Определение антигенов HLA-А, В, DR локусов методом проточной цитофлуориметрии	Реципиент и(или) донор	8-9	Кровь, антикоагулянт К2ЭДТА	Молекулярно-генетический
Определение наличия HLA-антител в образце сыворотки методом проточной флуорометрии	Реципиент	8-9	Кровь, гель и активатор свертывания	Проточная цитометрия
Определение процента сенсибилизации сыворотки HLA-антителами методом проточной цитометрии	Реципиент	8-9	Кровь, гель и активатор свертывания	Проточная цитометрия
Определение донорского химеризма у реципиентов после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (костного мозга)
Определение химеризма у пациента после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток методом капиллярного секвенирования	Реципиент (образец крови до трансплантации и после трансплантации)	5-9	Кровь, антикоагулянт К2ЭДТА	Молекулярно-генетический
	Донор ГСК	5-9	Кровь, антикоагулянт К2ЭДТА	Молекулярно-генетический

Приложение 2 к приказу

Положение о деятельности HLA-лаборатории

Глава 1. Общие положения

1. Настоящее Положение о деятельности HLA-лаборатории разработано в соответствии с пунктом 2 статьи 211 Кодекса Республики Казахстан от 7 июля 2020 года "О здоровье народа и системе здравоохранения" (далее – Кодекс) и определяют положение о деятельности HLA-лаборатории.

2. HLA - лаборатории функционируют как структурное подразделение при организациях, осуществляющих деятельность в сфере донорства, заготовки крови, ее компонентов и препаратов.

3. К HLA - лабораториям относятся:

1) центральная лаборатория иммунологического типирования тканей (части тканей) и(или) органов (части органов) (далее – Центральная лаборатория), которая создается при республиканской государственной медицинской организации, осуществляющей научную деятельность и деятельность в сфере донорства, заготовки крови, ее компонентов и препаратов;

2) локальная лаборатория иммунологического типирования тканей (части тканей) и(или) органов (части органов) (далее – локальная лаборатория), которая создается при государственных медицинских организациях, осуществляющих деятельность в сфере донорства, заготовки крови, ее компонентов и препаратов в областях и городах республиканского значения.

4. В своей работе HLA - лаборатории руководствуются Конституцией Республики Казахстан, Кодексом Республики Казахстан "О здоровье народа и системе здравоохранения", настоящим положением, приказами Министерства здравоохранения Республики Казахстан, регламентирующими вопросы иммунологического обследования доноров и реципиентов при трансплантации тканей (части тканей) и(или) органов (части органов).

5. HLA - лаборатории осуществляют деятельность по вопросам иммунологического обследования доноров и реципиентов при трансплантации тканей (части тканей) и(или) органов (части органов) в круглосуточном режиме.

Глава 2. Задачи HLA-лабораторий

6. Основными задачами HLA-лаборатории являются:

1) центральная лаборатория:

организационно-методическое руководство локальными лабораториями;

консультативная помощь локальным лабораториям;

научная деятельность по исследованию лейкоцитарных антигенов человека (далее – HLA);

образовательная деятельность по вопросам иммунологического обследования доноров и реципиентов при трансплантации тканей (части тканей) и(или) органов (части органов);

обеспечение всеми видами иммунологического исследования реципиентов и их доноров для организаций, осуществляющих трансплантацию органов (части органа) и(или) тканей (части ткани);

проведение иммунологического обследования реципиентов, состоящих в Листе ожидания курируемого региона;

проведение экспертных лабораторных исследований по иммунологическому обследованию доноров и реципиентов при трансплантации тканей (части тканей) и(или) органов (части органов) для локальных лабораторий при спорных и сложных случаях;

2) локальная лаборатория:

обеспечение всеми видами иммунологического исследования реципиентов и их доноров для организаций, осуществляющих трансплантацию органов (части органа) и(или) тканей (части ткани);

проведение иммунологического обследования реципиентов, состоящих в Листе ожидания курируемого региона;

организация сбора сывороток реципиентов, нуждающихся в проведении трансплантации тканей (части тканей) и(или) органов (части органов) (далее – реципиентов);

проведение HLA-исследований для иммунологического контроля за приживлением пересаженных органов и тканей.

Глава 3. Функции HLA- лабораторий

7. В соответствии с поставленными задачами HLA-лаборатории осуществляют следующие функции:

1) проведение HLA-исследований у реципиентов и доноров при трансплантации почек и поджелудочной железы от прижизненного и(или) посмертного донора;

2) проведение HLA-исследований у реципиентов и доноров при трансплантации других органов (печень, сердце и другие) прижизненного и(или) посмертного донора;

3) проведение HLA-типирования реципиентов и доноров при трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (костного мозга) от родственных доноров;

4) проведение HLA-исследований у реципиентов, включаемых Лист ожидания курируемого региона;

5) проведение HLA-типирования потенциальных доноров для формирования Регистра доноров гемопоэтических стволовых клеток и пуповинной крови для формирования банка пуповинной крови;

6) постановка пробы на совместимость "кросс-матч" донора и реципиента при трансплантации органов;

7) определение донорского химеризма у реципиентов после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (костного мозга);

8) проведение посттрансплантационного мониторинга HLA-антител у реципиентов, перенесших трансплантацию органа (ткани);

9) осуществление индивидуального подбора тромбоцитов реципиентам на основе HLA-фенотипа при необходимости.

8. Организационно-методическое руководство и научные функции Центральной лаборатории:

1) координация деятельности Локальных лабораторий по сбору сывороток реципиентов, нуждающихся в трансплантации органа, для определения предсуществующих антител и пробы на совместимость "кросс-матч";

2) осуществление организационно-методического руководства Локальными лабораториями в части сбора, скрининга, заготовки антилейкоцитарных сывороток и иммунологического типирования крови для выявления корреляций с различными заболеваниями, при популяционных научных исследованиях;

3) мониторинг и анализ деятельности Локальных лабораторий;

4) формирование основных направлений по совершенствованию методов, используемых в тканевом типировании;

5) планирование и координация подготовки кадров для лабораторий тканевого типирования республики, участие в проведении обучения для специалистов Локальных лабораторий;

6) проведение научных работ по изучению распространенности HLA-фенотипов в казахстанской популяции, взаимосвязей изучаемых HLA-фенотипов с различными видами заболеваний, исследований генома человека;

7) изучение и трансферт в практику лабораторий иммунологического типирования республики новых методов исследований;

8) внедрение в практику медицинских организаций иммуногенетических и геномных исследований при диагностике различных патологических состояний, оценке и прогнозировании эффективности лечения, формировании групп риска среди населения с целью организации профилактических мероприятий для предупреждения ряда заболеваний, проведение популяционных исследований;

9) разработка плана и программы международного сотрудничества в области тканевого типирования, участие в международных рабочих совещаниях, обмен анти-HLA сыворотками с зарубежными лабораториями для совершенствования тест-реагентов, методов тканевого типирования;

10) проведение исследований, по внешней оценке, качества и проведение межлабораторных сравнительных испытаний.

9. Организационные и консультативные функции Локальной лаборатории:

1) участие в составлении планов по повышению квалификации сотрудников организации здравоохранения по вопросам иммунологического типирования тканей;

2) организация разъяснительной работы по вопросам клинического значения иммунологических исследований;

3) представление отчетов о проделанной работе в Центральную лабораторию.

10. Структура и штатные нормативы Центральной лаборатории определяются в соответствии с законодательством Республики Казахстан.

11. Локальную лабораторию возглавляет лицо, прошедшее специализацию в Центральной лаборатории иммунологического типирования тканей (части тканей) и(или) органов (части органов), назначаемое на должность в установленном законодательством порядке.